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    高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-11-11  點(diǎn)擊次數(shù): 1852次

    高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

    轉(zhuǎn)染條件

    細(xì)胞密度:60左右

    質(zhì)粒DNA濃度:648ng/ul

    質(zhì)粒DNA大小:10646bp

    培養(yǎng)板:6孔板

    轉(zhuǎn)染試劑用量:8ul

    質(zhì)粒DNA用量:電訊

    轉(zhuǎn)染試劑:AD600150,Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

    轉(zhuǎn)染時(shí)間:48小時(shí)

    血清:Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

    細(xì)胞凍存:CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液

    細(xì)胞活力檢測(cè):K009-500,CCK8


    操作方法

    提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

    核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

    在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

    細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

    分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。


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