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    HK-2細(xì)胞出現(xiàn)空泡是正常的嗎?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-01-04  點(diǎn)擊次數(shù): 1472次

    建系背景



    人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞系HK-2,取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮,通過(guò)轉(zhuǎn)入HPV-16 E6/E7基因構(gòu)建而成,并在無(wú)血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長(zhǎng)了一年多。HK-2的生長(zhǎng)依賴于表皮生長(zhǎng)因子EGF,保留了良好的PTCs的表型。


    陽(yáng)性表達(dá):堿性磷酸酶;γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶;亮氨酸氨肽酶;酸性磷酸酶;細(xì)胞角蛋白; α3β1 整合素;纖連蛋白。


    陰性表達(dá):因子VIII 相關(guān)抗原、6.19 抗原和 CALLA 內(nèi)肽酶呈陰性。


    常見(jiàn)問(wèn)題


    在培養(yǎng)HK-2細(xì)胞的時(shí)候,常會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)節(jié)問(wèn)題,不可掉以輕心。本文為大家總結(jié)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞常見(jiàn)的問(wèn)題,以及解決方案。


    出現(xiàn)空泡

    01


    空泡問(wèn)題需要結(jié)合生長(zhǎng)速度和形態(tài)來(lái)看:如果生長(zhǎng)速度和形態(tài)正常,空泡可能是正常的細(xì)胞活動(dòng),傳代后空泡即可減輕。


    如果生長(zhǎng)較慢,形態(tài)異常,空泡可能是自噬行為,可加大血清比例(不超過(guò)20%)或更換血清品牌改善細(xì)胞狀態(tài)。


    圖片



    出現(xiàn)拉絲

    02


    細(xì)胞伸出細(xì)長(zhǎng)的絲有兩種情況:


    第一種情況是細(xì)胞遷移造成的,細(xì)胞在培養(yǎng)皿上并不是靜態(tài)的,也會(huì)出現(xiàn)遷移。遷移時(shí)細(xì)胞的一部分滯留在原處,遷移的過(guò)程中會(huì)拉出一條細(xì)長(zhǎng)的絲。這種情況下拉絲的細(xì)胞占少數(shù),細(xì)胞整體的生長(zhǎng)狀態(tài)是正常的,不用特殊處理。


    第二種情況是營(yíng)養(yǎng)不良,拉絲的細(xì)胞占大多數(shù),同時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,此時(shí)可以提高血清比例(不超過(guò)20%)或添加5 ng/mL EGF。


    形態(tài)不對(duì)

    03


    正常的HK-2呈鋪路石狀生長(zhǎng),如果細(xì)胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀(如下圖),可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)環(huán)境發(fā)生了較大的改變,比如從有血清到無(wú)血清的轉(zhuǎn)換,此時(shí)換回原來(lái)的培養(yǎng)條件細(xì)胞可逐漸恢復(fù);如果細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng),這時(shí)候可能是營(yíng)養(yǎng)不良。

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    生長(zhǎng)緩慢

    04


    在普諾賽標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3傳代條件下,HK-2的傳代周期約為3天。


    當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,一周無(wú)法傳代時(shí),需要考慮培養(yǎng)基特別是血清是否合適。


    選擇合適的培養(yǎng)基及血清,同時(shí)加大細(xì)胞接種密度可以改善。


    培養(yǎng)基選擇


    HK-2最初建系使用無(wú)血清培養(yǎng),眾多文獻(xiàn)以及實(shí)踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下,HK-2也能良好生長(zhǎng)。


    但胎牛血清的質(zhì)量是關(guān)鍵,胎牛血清品質(zhì)越高,HK-2狀態(tài)越好。


    若使用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng),需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養(yǎng)瓶,以促使貼壁。



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