亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀,无码人妻久久一区二区三区不卡,把高冷校花压在桌上进进出,国产亚洲精品久久久久久国模美

銷售熱線

19126518388
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 脂質體介導的瞬時轉染

    脂質體介導的瞬時轉染

    發(fā)布時間: 2022-12-06  點擊次數(shù): 950次

    材料與儀器

    L8057-Y10細胞 D-PBSA
    培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)板 F12 FB培養(yǎng)基 G418(Invitrogen) 選擇性培養(yǎng)基 電穿孔 電穿孔專用杯 電穿孔儀II 電穿孔儀-II配套的效能擴增器-Plus

    步驟

    表達載體與 DNA 制備:

    pSVTKGH,線性化 [ Selden et al.,1986]

    此載體含有 SV 40 增強子及單純皰疹病毒胸苷激酶啟動子序列,兩者可啟動人類生 K 激素(hGH ) 基因表達。hGH 可直接分泌到組織培養(yǎng)基上,可通過放射免疫學分析法直接檢測 [ Ravid et al.,1991 ]。

    pcDNA3,線性化(Invitrogen )

    該表達載體在多克隆位點上游含有人類巨細胞病毒增強子-啟動子,下游含多聚腺苷酸信號及牛生長激素(bGH ) 基因的轉錄終止序列。pcDNA3 載體還含有新霉素抗藥基因,用作篩選穩(wěn)定表達目的基因的抗性克隆。如本章方法中所述,pcDNA3 也可用作與報告基因載體共轉染的篩選標記。

    1. 以 5X105個/ml 的濃度在 75 cm2 培養(yǎng)瓶中接種 L8057-Y10 細胞(F12/FB 培養(yǎng)基)(含谷氨酰胺(2 mmol/L ),青霉素(50 U/ml ) 及鏈霉素(5 μg/ml ) 的 Ham’s F12 , 添加 10% FBS (熱滅活;GIBCO #16140-014)),并于 37°C,5% CO2 孵箱培養(yǎng)細胞。

    2. 在對數(shù)生長后期,收集細胞,4°C ,380 g 離心 5 min。

    3. 用 10ml D-PBSA 洗滌細胞沉淀,4°C,380 g 離心 5 min。

    4. 用 5 ml 電穿孔緩沖液洗滌細胞沉淀,用血細胞計數(shù)儀計數(shù)細胞。

    5. 4°C,380 g 再次離心 5 min,收集細胞。

    6. 用電穿孔緩沖液將細胞制成密度為 1X106 個/0.8 ml 的細胞懸液。

    7. 將 0.8 ml 的細胞移至預冷的電穿孔杯中。

    8. 分別加入 50 μg 和 5 μg 線性 pSVTKGH 及線性 pcDNA3 (如果實驗目的是檢測特異基因啟動子-報告基因表達,還需另設無質粒 DNA 的電穿孔細胞,作為陰性對照)

    9. 一只手緊握電穿孔杯,另一只手輕彈底部,以混勻 DNA-細胞懸液,將懸液于冰上孵育 10 min。

    10. 在 400V /500 μF 條件下轟擊細胞懸液,并記錄時間。

    11. 之后,取出電穿孔杯,在冰上擱置 10 min。

    12. 將轟擊后的細胞移至盛有 10 ml F12/FB 的離心管中,另取少許培養(yǎng)基沖洗電穿孔杯,移回到離心管,離心,收集細胞。

    13. 將細胞于 20 m l F12/FB 中再次懸浮,種到 75 cm2 培養(yǎng)瓶中,于37°C ,5 %CO2 培養(yǎng)箱中孵育,令新霉素抗性基因表達。

    14. 24~48 h 后,離心收集細胞,然后用 20 ml 選擇性培養(yǎng)基中再次懸浮細胞。

    15. 隨后,需每 2~4 天換液(選擇性培養(yǎng)基),以清除死亡細胞的碎片,并且使抗性細胞生長,篩選過程至少需要兩周。

    16. 測定 hGH 在細胞上清液的表達(見 27. 11.5 節(jié))。


    以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)



產品中心 Products
青青精品视频国产| 农民人伦一区二区三区| 久久精品国产亚洲AV嫖农村妇女 | 欧洲美女与动交ZOZ0Z| porno日本| 破苞XXXX出血| 天天躁日日躁狠狠躁| 少妇粗话肉麻对白视频6| 国产做a爰片毛片a片美国| 少妇一边喂奶一边跟我做| 两个人免费完整版在线观看视频| 久久久久久亚洲精品不卡| 国产又黄又爽又湿的免费网站| 日日摸天天爽天天爽视频| 清纯校花粉嫩粗大进出好爽| 国产成人无码一二三区视频| 人人妻人人爽人人做夜欢视频| 高清视频在线观看| 精品人妻伦九区久久AAA片| 51国产偷自视频区视频| 少妇扒开腿让我爽了一夜| 新婚之夜玩弄人妻系列| 国产VA免费精品观看精品| 无码少妇A片一区二区三区| 一体一道久久88色合综合网| 无码无套少妇毛多18P| 国产精品99久久久久久人四虎| 中文在线ずっと好きだった| 亚洲一区二区三区av天堂| 男女一边摸一边做爽爽的免费视频 | 老师破女学生处特级毛OOO片| 朝鲜女人毛多水多又紧又滑| 国产麻豆精品一区二区三区V视界| 无码人妻少妇色欲AV一区二区 | 亚洲日韩一区精品射精| 老熟妇小伙子HD另类| 护士趴下光屁股翘臀被打的作文| 国产精品毛片久久久久久久| 久久久久免费毛a片免费一瓶梅| 小苹果电影完整版在线观看| 性做久久久久久久久|