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    穩(wěn)定載體時,為什么載體上通常有兩個抗性基因?

    發(fā)布時間: 2024-05-28  點擊次數(shù): 2182次

    構(gòu)建的載體上有兩個抗性基因,但一般只有一個抗性用來篩細(xì)胞。兩個抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢?


    我們來看看這個例子,現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜,載體上有兩個抗性基因,Amp(氨芐青霉素)和Neo(新霉素)。


    氨芐青霉素是在bla啟動子驅(qū)動下表達(dá),bla是原核表達(dá)啟動子,在大腸桿菌可以表達(dá),因此,轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來。


    而新霉素是在SV40啟動子驅(qū)動下表達(dá),SV40是真核表達(dá)啟動子,轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞后表達(dá),所以只有轉(zhuǎn)進(jìn)了載體的細(xì)胞才能被篩選出來。


    所以,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時,載體上的兩個抗性基因,一個用于構(gòu)建克隆時篩選細(xì)菌,另一個用來對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選。


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