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    如何合理設(shè)計細胞加藥濃度?

    發(fā)布時間: 2025-04-25  點擊次數(shù): 929次

    1.概述
    藥物,或一切化學(xué)品對細胞的生理狀態(tài)是否能造成影響,能造成多大的影響,是生物學(xué)的基礎(chǔ)實驗之一。CCK-8與MTT等藥物毒性實驗就是一種測量方法。我們都知道“脫離劑量談毒性都是耍潑皮",那么如何設(shè)置實驗中藥物的濃度呢?通常有兩種情形:

    直接取一個固定的濃度,如40μM;

    設(shè)置一組濃度梯度,如10μM、30μM、100μM。

    這二者有什么不同?如何針對自己的實驗需求來選擇呢?我們將在下文介紹。

    2 固定濃度的情形

    一般來說,如果文獻直接甩出一個固定濃度進行實驗,沒有進行量效測試,說明這個藥物的效應(yīng)是已知的,就像數(shù)學(xué)答案里的“易得"。

    這個時候就應(yīng)該查找這段method中是否給出了引用文獻。效應(yīng)濃度已經(jīng)在更早期的實驗中確定了,該文章作者本人研究所用的細胞樣本應(yīng)該和早期文獻也能保持一致,所以他是在復(fù)現(xiàn)實驗,直接照做就可以了。

    如果我們是在自己取值做實驗,通常這個濃度可能可以從以下角度推導(dǎo)得到:

    基于藥物的藥理學(xué)研究,如藥代動力學(xué)參數(shù):如果這是一個已知的藥物分子,我們不是第一次合成得到它,第一次提出以它作為藥物的文獻應(yīng)該會提供其藥理學(xué)數(shù)據(jù),如半衰期、分布容積等參數(shù),可以基于研究實驗的目的計算決定;

    基于臨床用藥的習(xí)慣劑量:如果這個藥物已經(jīng)用于臨床了,可以參考臨床報告的劑量;

    直接抄以前的文獻,拿來吧你:這就是第一段所說的情況,已經(jīng)有人做實驗得到結(jié)論了,那我們可以直接使用同種細胞進行進一步的研究,反而保證了結(jié)論的可重復(fù)性。

    3 濃度梯度的情形

    如果一個文獻做了多個濃度或多個時間點來測試藥物效果,那最大的可能是該文獻所研究的細胞或藥物此前沒人做過,作者沒得引用,所以只能先做量效測評。

    所以此時設(shè)計上就要考慮做梯度濃度+不同時間段的設(shè)計,從一系列實驗結(jié)果中找到濃度。

    如何設(shè)計梯度和組別呢?如果有人做過類似的藥物或類似的細胞,我們可以引用前人的智慧,照搬之下再根據(jù)實驗?zāi)繕俗饕欢ㄐU?;如果沒參考對象,我們可以從以下角度:

    設(shè)置濃度梯度,搞清楚IC50:先進行濃度梯度測試,用5-8個梯度去做預(yù)實驗,比如每個梯度差別一倍(10、20、40、80、160μM),總之要覆蓋藥物從低毒性到高毒性(甚至毒性過強導(dǎo)致細胞死亡)的濃度范圍,據(jù)此分組測細胞毒性和增殖,摸清楚這個藥物的IC50;(IC50計算可使用豆包或deepseek解決)

    探索藥物有效劑量的范圍,發(fā)現(xiàn)劑量-效應(yīng)之間的規(guī)律:基于IC50縮減劑量覆蓋的范圍,設(shè)置更細化的分組,嘗試畫出藥效隨劑量增加而上升達到峰值、然后隨劑量過量導(dǎo)致細胞死亡的曲線。

    原則即:找出藥物產(chǎn)生效應(yīng)的最佳濃度(閾值)以及不同濃度對細胞的影響趨勢。


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