siRNA轉(zhuǎn)原代肌腱細胞轉(zhuǎn)染試劑

一、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、品牌

ZETA LIFE

2、包裝規(guī)格

貨號：AD600075

規(guī)格：0.75ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。

二、使用說明：

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。

三、注意事項：

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。

3、復(fù)合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉(zhuǎn)染時，細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。

四、各品牌轉(zhuǎn)染試劑類型與Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑的差異比較：

1、Thermo品牌Lipo 2000采用陽離子脂質(zhì)體，需要更換培養(yǎng)基；特點是毒性大；轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基；可以轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA（效果差）。

2、Thermo品牌Lipo 3000采用陽離子脂質(zhì)體，需要更換培養(yǎng)基；特點是相比Lipo 2000毒性略??；轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基；可以轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA（效果較差）。

3、Thermo品牌RNAiMAX采用陽離子脂質(zhì)體，需要更換培養(yǎng)基；特點是專門用來轉(zhuǎn)RNA，對于細胞系的轉(zhuǎn)染效率一般，對干細胞和神經(jīng)原代細胞轉(zhuǎn)染效果差。

4、Promega品牌FuGENE 6采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液，需要更換培養(yǎng)基；特點是本質(zhì)還是脂質(zhì)體；只能轉(zhuǎn)DNA；含有微量動物源成分，適用細胞種類因此受限；轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基；親塑性，轉(zhuǎn)染效率會因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

5、Roche品牌FuGENE HD采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液，需要更換培養(yǎng)基；特點是本質(zhì)還是脂質(zhì)體；只能轉(zhuǎn)DNA；親塑性，轉(zhuǎn)染效率會因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

6、Zeta Life品牌Advanced系列采用新型工業(yè)材料，不需要更換培養(yǎng)基；特點是不需要換液，無細胞毒性，轉(zhuǎn)染效率高，適用細胞種類多，可轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA及小動物活體轉(zhuǎn)染。

siRNA轉(zhuǎn)原代肌腱細胞轉(zhuǎn)染試劑各規(guī)格：

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600025        0.25ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600050        0.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600075        0.75ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600150        1.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600500        5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD601000        10ml