亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀,无码人妻久久一区二区三区不卡,把高冷校花压在桌上进进出,国产亚洲精品久久久久久国模美

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 如何在WB中順利獲取大分子蛋白?

    如何在WB中順利獲取大分子蛋白?

    發(fā)布時間: 2021-09-17  點(diǎn)擊次數(shù): 3280次

    分子量大于 150Ka 的蛋白,經(jīng)常折磨我們實(shí)驗人。想當(dāng)初,辛辛苦苦忙到深夜,結(jié)果發(fā)現(xiàn)顯影空空如也。連續(xù)幾個月如此,內(nèi)心是何等抓狂。當(dāng)大分子條帶第一次出來的時候,心里特別開心,就像見到了初戀情人一樣。看到周圍有同仁受困于大分子蛋白,想一想當(dāng)初所面對的困境。 

    在此,分享一下大分子蛋白的心得,希望這些經(jīng)驗對那些與大分子蛋白奮戰(zhàn)的童鞋提供幫助。 

    提蛋白時應(yīng)加入 RIPA 強(qiáng)效裂解液,在 4℃環(huán)境下靜置的時間延長十分鐘到二十分鐘。這樣可以充分裂解大分子蛋白(裂解不充分,大分子蛋白的電泳速度會很慢)。電泳時,電泳的時間要足夠長。

    電泳全程采用 120-150V 的高電壓,使 Marker 拉開足夠大的距離。電泳時要在冰水浴中進(jìn)行。 

    轉(zhuǎn)膜時,濕轉(zhuǎn)法與半干轉(zhuǎn)法均可以(濕轉(zhuǎn)法獲得條帶漂亮。半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜效率高),轉(zhuǎn)膜時,要保留分離膠(好多分子量超過 250KDa 的蛋白就殘留在濃縮膠中!這是血的教訓(xùn)!當(dāng)初好 幾次傻傻的把濃縮膠扔了,結(jié)果神馬條帶都沒有?。?/p>

    先說濕轉(zhuǎn)法,轉(zhuǎn)膜緩沖液中甲醇濃度最高 10%,加入 SDS,使 SDS 終濃度達(dá)到 5%(大于 300KDa 的蛋白,轉(zhuǎn)膜液中 SDS 的終濃度可以到 10%)。以下摸索出來濕轉(zhuǎn)法的轉(zhuǎn)膜時間(曾經(jīng)試驗過 30mA 小電流轉(zhuǎn)膜過夜的方法,PVDF 膜上神馬都沒有。建議大家不要嘗試!)。

    如何在WB中順利獲取大分子蛋白?

    用半干轉(zhuǎn)時轉(zhuǎn)膜效率高。恒壓模式設(shè)置為 40V 電壓,轉(zhuǎn)膜 60-90min。一般小于 400KDa 的蛋白都能轉(zhuǎn)到 PVDF 膜上。 

    或者用恒流法轉(zhuǎn),電流大小設(shè)置為 PVDF 膜的面積,轉(zhuǎn)一個小時左右就可以出來。若怕轉(zhuǎn)膜過頭,可以將兩張 PVDF 膜重疊起來(總會有一張膜上有條帶)。 

    因為多數(shù)大分子蛋白是膜蛋白,表達(dá)較少,建議延長一抗孵育時間。有一次甚至孵育了四天才出結(jié)果。大分子蛋白與 PVDF 膜的結(jié)合不是很牢固,容易脫落,因此在洗膜時要操作輕柔,不要過于粗暴,否則抗原抗體復(fù)合物容易脫落。 

    這些經(jīng)驗是從幾百次失敗的實(shí)驗中總結(jié)出來的,希望對大家有所幫助。實(shí)驗失敗不可怕, 重要的是要勇于面對,仔細(xì)思考,敢于改進(jìn)。

    最后,祝大家實(shí)驗順利,早出漂亮結(jié)果!


產(chǎn)品中心 Products
免费观看全黄做爰| 国产人妻人伦精品无码.麻豆| 中文字幕乱码在线人视频 | 欧美大胆a级视频免费| 色婷婷国产精品视频一区二区三区| 国产韩国日本欧美的品牌SUV| 从书房一路做到阳台| 久久人人爽人人爽人人片Ⅴ| 亚洲AV区无码字幕中文色 | 农村艳妇疯狂做爰| 97高清国语自产拍| 一本大道精品成人免费视频| 国产边添边摸边做边爱| 岳肥肉紧嫩嫩伦69| 1313久久国产午夜精品理论片 | 成视频年人黄网站免费视频| 又小又紧女MAGNET| 息与子猛烈交尾在线播放| 国产成人AV无码一二三区| 无码精品人妻一区二区三区中| A级毛片在线看| 人妻仑乱A级毛片免费看| 蜜桃成人无码AV在线观看一电影| 极品少妇XXOO无码播放| 久久热这里只有精品| 西西人体做爰大胆性自慰| 无遮挡边吃摸边吃奶边做| 欧美黑人乱大交BD| 无码又爽又刺激A片涩涩动漫 | 国产毛A片啊久久久久久| 2022国产成人精品视频人| 欧美精品黑人粗大视频| 亲子乱av视频一区二区| 三年片在线观看免费大全爱奇艺| 久久精品丝袜高跟鞋| 精品综合久久久久久98| 人禽伦免费交视频播放| 伊人久久综合热线大杳蕉岛国 | 少妇放荡的呻吟干柴烈火| 爽欲亲伦96部分| 中文字幕被公侵犯的漂亮人妻|